30秒速览：本文要点
- 细胞肥大化是衰老的信号。反复分裂之后的细胞变得扁平而肥大，这一形态变化被报告为细胞衰老的特征，可作为反映原料细胞状态的参考。
- 实测差异为直径1.5倍、体积约3.4倍。传统培养基培养30天为直径22.3μm，自主研发培养基培养20天为14.9μm。
- 目的不是主张治疗效果，而是生产质量管理。这是为了让采集时点的细胞状态在各批次（在相同条件下一次生产的单位）之间保持一致而做的记录。
1. 肥大化说明了什么——细胞分裂的“计次卡”
先说要点：细胞肥大化被报告为反复分裂之后的细胞所出现的衰老信号。它并非只是外观上的变化，而是反映细胞状态的指标。
已知细胞能够分裂的次数存在上限，就像一张次数有限的计次卡。用掉较多次数、也就是反复分裂之后的细胞，会出现扁平化（变平并向外铺展）与肥大化等形态变化。这是伴随细胞衰老（replicative senescence）出现的特征之一。
在分泌组（细胞在培养过程中分泌的成分的总和）的生产中，这一形态具有实际意义。就像用同一份配方烹饪，食材状态不同，成品也难以一致；作为原料的细胞状态若因批次而异，从中采集到的分泌成分组成也就难以保持一致。
直观要点
细胞大小是无论由谁测量都会得到相同数值的客观指标。本公司将细胞大小作为判断采集时机的依据之一，予以测定并记录。
2. 实测数据——直径 22.3μm 与 14.9μm
先看结果。用传统培养基培养30天的细胞直径为 22.3μm，用自主研发培养基培养20天的细胞为 14.9μm。以下是用血细胞计数板（在显微镜下计数细胞的器具）拍摄的实际细胞，以相同放大倍率并排展示。
细胞直径 22.3 ± 0.75 μm
细胞直径 14.9 ± 0.21 μm
左侧细胞大小参差不齐，可见轮廓破损的细胞和团块。右侧则是圆形细胞大小一致地分布。数值后标注的“±”为标准误差（SEM）。
直径上1.5倍的差异，换算成体积则为约3.4倍。实际差距比数字表面看上去更大。
直观要点
气球的直径变为1.5倍时，能装进去的空气量按三次方计算，约为3.4倍。细胞也一样，“直径1.5倍”在内容物的量上相差约3.4倍。直径这个数字，需要换算成体积来解读。
3. 差异从何而来——达到目标所需的天数
先说结论，造成差异的是达到所需细胞数之前所用的天数。并不存在能够阻止肥大化本身的特殊处理。
能够在更短的培养期内获得所需细胞数，意味着可以在肥大化进一步发展之前完成采集。如果能提前10天到达同一个目的地，采集到的细胞状态自然更“年轻”。
直观要点
这并不是“阻止衰老”的技术，而是“缩短等待时间”的机制。并非对细胞施加了什么特殊处理，而是到采集为止所需的天数更短，这才形成了图1所示的直径差异。
增殖过程
速度上的差异，在中途的过程中也有体现。以下是培养第6天与第10天的相差显微镜图像，每组左侧为传统培养基，右侧为自主研发培养基。
培养第 6 天
培养第 10 天
以相同天数对比，可以清楚看出细胞铺满视野的速度差异。到第10天时，自主研发培养基中的细胞已几乎覆盖整个视野。
4. 形态之外的佐证——表面标志物
先说结论：在与形态相互独立的测定中，也确认到了同一方向的差异。照片给人的印象容易掺入主观判断，因此我们同时测定了用于鉴定间充质干细胞（可分化为骨、脂肪等的干细胞）的表面标志物。
| 项目 | 其他公司培养基 | 自主研发培养基 | 判定 |
|---|---|---|---|
| 存活率 | 97.2% | 99.1% | 越高越好 |
| CD44 | 100% | 100% | 阳性 |
| CD73 | 99.5% | 100% | 阳性 |
| CD90 | 99.2% | 100% | 阳性 |
| CD105 | 85.3% | 99.2% | 阳性 |
| HLA-ABC | 98.6% | 98.6% | 阳性 |
| CD31 | 0.6% | 0.5% | 阴性 |
| CD45 | 0.3% | 0.2% | 阴性 |
| HLA-DR | 0.3% | 0.4% | 阴性 |
阳性与阴性的划分依据国际细胞治疗学会（ISCT）提出的间充质干细胞最低标准。
值得关注的是 CD105，从 85.3% 提高到 99.2%，相差 13.9 个百分点。CD105 是已知会随着传代（把增殖后的细胞分开并继续接种培养）次数增加而下降的标志物；它与细胞大小是不同的尺度，却指向同一方向。
其他阳性标志物本身数值就很高，差异很小。阴性标志物两者都足够低，仅 HLA-DR 在自主研发培养基中略高，但均低于1%。
5. 如何解读这些数据——三个前提
阅读这些数据之前，有三个前提需要读者了解。为求公允，在此先行写明。
- 这并非同一时间点的对照实验。传统培养基为30天达到相当于1亿个细胞，自主研发培养基为20天达到相当于5亿个细胞，培养天数与达到的细胞数两者均不相同。对于“若统一为相同天数会如何”这一问题，本数据并未给出回答
- 作为比较对象的“其他公司产品”未予公开。该比较并不具备第三方在相同条件下复现的条件
- 细胞直径后标注的“±”为标准误差（SEM）
在此前提下，本文所展示的是生产工艺中对原料细胞状态的管理。其目的在于记录采集时点的细胞大小，并使各批次之间保持一致。这并不是用于比较治疗效果优劣的数据。
亦承接委托培养
本文介绍的培养基与培养技术，不仅用于本公司产品的生产，也可作为委托培养服务提供。对于希望在不使用动物来源成分的条件下扩增细胞、希望统一采集时点细胞状态等需求，我们均可对应。
- 服务内容
- 间充质干细胞的扩增培养、培养条件咨询，以及细胞数、细胞直径、表面标志物的测定
- 培养环境
- 银座生产设施的万级（Class 10,000）洁净室内，百级（Class 100）生物安全柜
- 培养基
- 不含其他动物来源原料、无血清、无蛋白的自研培养基
- 咨询流程
- 在了解细胞种类、需求量与时间安排后，向您说明可否承接并提供报价
视具体条件，也存在无法承接的情况，请先与我们联系。在联系表单中选择“委托培养咨询”后，将由负责人与您联系。
关于培养上清液与分泌组的区别，请参阅解析两者差异的这篇文章。
常见问题
细胞变大会带来什么问题？
细胞的扁平化与肥大化，被报告为反复分裂之后的细胞所呈现的形态变化。作为原料的细胞状态若因批次而异，从中采集到的分泌成分组成也就难以保持一致。本公司将细胞大小作为采集判断依据之一予以记录。
直径相差1.5倍，实际差距有多大？
将细胞假定为球体时，体积与直径的三次方成正比。直径 22.3μm 与 14.9μm 之间，直径比约为1.50倍，体积比约为3.4倍。
可以委托贵公司进行培养吗？
可以承接。我们可对应在不使用动物来源成分的培养条件下进行扩增培养（把细胞增殖至所需数量的工序），以及细胞数、细胞直径、表面标志物的测定。视细胞种类、需求量与时间安排，也存在无法承接的情况，请通过联系表单中的“委托培养咨询”与我们联系。
会公开成分数据吗？
我们对每个生产批次测定细胞因子含量与外泌体中的miRNA含量，并可应要求提供检验报告。详情请参阅安全与质量体系。
本文旨在说明产品的生产方法与质量管理。本公司的干细胞分泌组仅作为研究用试剂供应，不用于证明对任何特定疾病的疗效。
参考文献
- 间充质干细胞的最低标准：Dominici M, et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 2006;8(4):315-317.（表面标志物阳性与阴性的划分依据）
- 伴随细胞衰老的形态变化：Wagner W, et al. Replicative senescence of mesenchymal stem cells: a continuous and organized process. PLoS ONE. 2008;3(5):e2213.（关于传代培养导致细胞增大与扁平化的报告）
- 实测值：本文中的细胞直径、增殖过程、表面标志物、存活率数值以及显微镜照片，均来自本公司的测定数据。