배양상청액의 “안전성 시험 완료”, 어디까지 믿을 수 있을까?
무균시험만으로는 부족한 이유

먼저 전체 그림 — 시험은 세 개의 층으로 나뉜다

배양상청액 · 분비단백체(세포가 배양 중에 분비한 성분의 총체)의 안전성 시험은 원료 · 공정 · 제제라는 세 개의 층으로 나뉩니다. 층이 다르면 막고 있는 위험도 다릅니다.

채소에 비유하면 밭의 토양 검사(원료) · 공장의 위생 관리(공정) · 출하 전 검품(제제)과 같은 관계입니다. 출하 전 검품만 가리켜 “검사 완료”라고 표시할 수도 있으므로, 말만으로는 구별이 되지 않습니다.

1. 원료 — 공여자 검사는 “입구”에서만 막을 수 있다

결론은 단순합니다. 세포를 제공한 공여자에서 유래하는 위험은 완성된 제제를 검사해도 찾아낼 수 없습니다. 바이러스는 통상의 무균시험으로는 검출되지 않고, 제조 공정에서 제거된다는 보증도 없기 때문입니다.

따라서 이 층은 세포를 받아들이기 전의 검사로 “애초에 반입을 막는” 것이 전부입니다. 당사는 생물유래 원료의 제조 규정에 따라 다음 검사를 실시하고 있습니다.

인간 전달성 해면상 뇌증은 문진에 의한 배제를 포함합니다. 소 혈청을 사용하지 않는 설계라는 점도 동물 유래 프리온 위험을 피하는 데 의미를 가집니다.

2. 공정 — 시험이 아니라, 혼입 확률을 낮추는 층

이 층의 요점은 시험이 아니라 설비와 운용의 문제라는 점입니다. 혼입을 나중에 찾아내는 것이 아니라, 혼입될 확률 자체를 낮춥니다.

당사는 클래스 10,000의 클린부스 안에 둔 클래스 100의 안전작업대에서 제조하며, 재생의료등 제품의 제조에 권장되는 환경 기준에 따라 운용하고 있습니다. 클래스 100은 1세제곱피트의 공기 중에 0.5μm 이상의 입자가 100개 이하인 수준을 말합니다.

주의하실 점은 청정도가 설비의 “등급”이며, 시험 결과나 인증과는 별개의 것이라는 사실입니다. 이 층은 확률을 낮추는 장치이며, 제품 자체의 상태는 다음의 제제 층에서 확인합니다.

3. 제제 — 세 가지 시험은 각각 다른 것을 보고 있다

이 글에서 가장 전해 드리고 싶은 부분입니다. 세 가지 시험은 “혹시 몰라 겹쳐 놓은” 것이 아니라, 각각 다른 것을 보고 있기 때문에 전부 필요하다는 관계에 있습니다.

무균시험 — “살아서 증식하는 것”을 본다

검체를 배지에서 배양하여 미생물이 증식해 오는지를 보는 시험입니다. 씨를 뿌려 싹이 트는지 확인하는 검사라고 생각하면 이해하기 쉽습니다. 세균이나 진균의 혼입을 검출합니다.

검출하지 않는 것: 싹이 트지 않는 것, 즉 그 배양 조건에서 증식하지 않는 미생물입니다. 마이코플라스마(세포벽을 갖지 않는 매우 작은 세균)가 대표적입니다. 또한 이미 죽은 균도 증식하지 않으므로 검출되지 않습니다.

마이코플라스마 음성시험 — 그물코를 빠져나가는 균을 잡는다

마이코플라스마는 세포벽을 갖지 않는 세균으로, 매우 작아서 통상의 무균시험 배양 조건에서는 검출되지 않습니다. 그물코보다 작은 물고기가 그물을 빠져나가듯, 무균시험에 적합하더라도 마이코플라스마는 부정할 수 없기 때문에 별도의 시험이 필요합니다.

세포 배양에서는 오염을 알아차리지 못한 채 배양이 계속되기 쉽다는 점이 문제가 됩니다. 그렇기 때문에 무균시험과는 별도의 확인이 빠질 수 없습니다.

엔도톡신 시험 — “죽은 균이 남긴 것”을 본다

엔도톡신(세균에서 유래하는 발열성 물질)은 그람음성균(외막을 가진 종류의 세균)의 세포벽 성분입니다. 모닥불이 꺼져도 재가 남듯, 균이 죽어도 남습니다. 즉, 무균시험에 적합하더라도 엔도톡신은 포함되어 있을 수 있습니다.

당사의 줄기세포 분비단백체는 0.1 EU/mL 미만입니다.

엔도톡신의 “미만”을 어떻게 읽을 것인가

결론부터 말씀드리면, “0.1 EU/mL 미만”과 같은 표기를 비교하실 때에는 숫자 자체보다 그 숫자가 어디에서 나왔는지가 중요합니다. 확인해 주셨으면 하는 점은 두 가지입니다.

첫째, 그 수치가 “검출한계”인지 “규격값”인지입니다. “미만”은 그 측정계로 검출할 수 없었다는 의미인 경우가 있습니다. 눈금이 성긴 저울일수록 “잴 수 없을 만큼 가볍다”고 말할 수 있는 범위가 넓어지는 것과 마찬가지로, 측정계의 감도가 낮으면 더 큰 수치라도 “미만”이라고 쓸 수 있게 됩니다.

둘째, 무엇을 단위로 한 값인가입니다. EU/mL은 액량당 값입니다. 같은 양의 소금이라도 물 한 컵에 녹이는지 한 양동이에 녹이는지에 따라 농도가 달라지듯, 동결건조 제제처럼 녹여서 사용하는 것에서는 몇 mL에 녹인 상태에서의 값인지에 따라 의미가 달라집니다.

공급처에 확인할 세 가지 질문 — 시험성적서(COA)로 확인한다

여기까지의 내용은 세 가지 질문으로 정리됩니다. 당사는 전 제품에 로트별 시험성적서(COA)를 발행하여 제품에 동봉하고 있습니다. 기재하고 있는 것은 무균시험 · 엔도톡신 · 마이코플라스마 · 단백질 농도의 결과입니다.

공급처를 비교하실 때에는 다음 순서로 문의하시기를 권합니다.

1. 전 로트에서 실시하는가, 대표 로트에 한하는가

   로트마다 측정하지 않았다면, 지금 손에 있는 제품에 대해 말할 수 있는 것은 없습니다.

2. 공여자의 검사까지 포함하는가

   제제의 시험만으로는 원료 층의 위험은 아무것도 보증되지 않습니다.

3. 로트 번호가 들어간 성적서를 실제로 받아 볼 수 있는가

   항목명의 목록이 아니라 성적서 자체를 청구해 보시기 바랍니다. 낼 수 있는지 여부로 운용의 실태를 알 수 있습니다.

이 밖에 당사는 제품안전보건자료(MSDS)와 첩포시험을 실시 항목에 포함하고 있습니다.

자주 묻는 질문

무균시험에 적합하면 세균은 들어 있지 않다고 보아도 됩니까.

무균시험은 배지에서 배양했을 때 증식해 오는 미생물을 검출하는 시험입니다. 그 배양 조건에서 증식하지 않는 미생물은 검출되지 않습니다. 마이코플라스마가 대표적이며, 통상의 무균시험으로는 찾을 수 없기 때문에 별도로 마이코플라스마 음성시험을 실시합니다. 또한 이미 죽은 그람음성균(외막을 가진 종류의 세균)은 무균시험으로 검출되지 않지만, 그 세포벽 성분인 엔도톡신은 남습니다. 세 가지 시험은 서로 다른 것을 보고 있으므로 모두 필요합니다.

“안전성 시험 실시”라고만 적혀 있는 경우, 무엇을 확인하면 됩니까.

어느 층을 검사한 시험인지 확인하시기 바랍니다. 안전성 시험은 원료인 공여자의 검사, 제조 공정의 관리, 최종 제제의 시험이라는 세 개의 층으로 나뉩니다. 제제의 무균시험만을 가리키는 경우와 공여자의 감염증 검사까지 포함하는 경우는 보증하는 범위가 전혀 다릅니다. 아울러 전 로트에서 실시하는지 대표 로트에 한하는지도 확인하시기 바랍니다.

시험성적서(COA)는 매번 발행됩니까.

전 제품에 로트별 COA를 발행하여 제품에 동봉해 보내 드리고 있습니다. 무균시험 · 엔도톡신 · 마이코플라스마 · 단백질 농도의 결과를 기재하고 있습니다.

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