Суть статьи за 30 секунд
- «Чистота 99%» меняется вместе со способом измерения. На одних и тех же пробах два метода разошлись на 5.2 пункта.
- Одинаковая чистота не значит одинаковый состав. У двух проб с чистотой около 97% обнаружено 3 и 7 видов примесей.
- α-форма, не работающая в организме, в числе не отражается. При химическом синтезе может появиться α-форма с той же молекулярной формулой, что и у β-NMN (вещество, из которого в организме образуется NAD⁺), поэтому уточняйте способ производства и то, указано ли содержание «в пересчёте на β-NMN».
Дальше разбираем эти три пункта по порядку — как три слепых пятна «чистоты 99%». Значения на рис. 1 и рис. 2 получены на четырёх пробах, которые мы приобрели.
Смените метод — и та же проба сдвинется на 5.2 пункта
Значение чистоты читается только вместе с методом, которым его получили
Начнём с вывода: «чистота 99%» без указания метода измерения не годится как мерило для сравнения. Число меняется в зависимости от того, как измеряли пробу.
Чистоту NMN измеряют в основном двумя методами: ЖХ-УФ (высокоэффективная жидкостная хроматография с УФ-детектированием: компоненты определяют по поглощению ультрафиолета) и ЯМР (ядерный магнитный резонанс: строение молекул изучают в магнитном поле).
Эти два метода видят разное. ЖХ-УФ — это как освещать тёмный склад одним фонариком: компоненты, которые откликаются на этот «свет», то есть на ультрафиолет, видны, а соли, растворители и вода в УФ-области не поглощают, и фонарик их не высвечивает, сколько бы их там ни было. ЯМР, напротив, проводит инвентаризацию всего склада и широко улавливает компоненты, содержащие водород.
Измерение одних и тех же четырёх проб обоими методами дало следующее.
У пробы A оба метода дают около 99%. Однако у пробы B метод ЖХ-УФ показывает 97.2%, а метод ЯМР — 92.0%: разрыв в 5.2 пункта. У пробы C расхождение составляет 3.9 пункта.
Главное
Это расхождение — не погрешность измерения. Оно означает, что компоненты, которых не видел фонарик (ЖХ-УФ), становятся видны при инвентаризации (ЯМР). Чем больше разрыв между двумя числами, тем больше «чего-то» без поглощения в УФ-области может содержать проба.
Поэтому, сопоставляя одну «чистоту 99%» с другой, сначала выясните, каким методом получено каждое число. Числа, полученные разными методами, изначально стоят на разных основаниях.
Разница в чистоте 0.3 пункта — примесей вдвое с лишним больше
Чистота ничего не говорит о том, что представляют собой оставшиеся несколько процентов
Второе слепое пятно: чистота показывает лишь то, какой процент приходится не на NMN. Из чего состоят эти несколько процентов — совершенно отдельная информация.
Для тех же четырёх проб приводим число видов примесей, обнаруженных методом ЖХ-УФ.
У пробы B чистота 97.2% и 3 вида примесей, у пробы D — 97.5% и 7 видов. Разница в чистоте — всего 0.3 пункта, а видов обнаруженных примесей более чем вдвое больше. Если выстроить их только по чистоте, обе выглядят практически равноценным сырьём.
Главное
Два материала с близкой чистотой — не «аналоги», а два материала, каждый со своими непроверенными несколькими процентами. Смотрите не столько на само значение чистоты, сколько на то, что и в скольких видах обнаружено в этом остатке.
α-форма, не работающая в организме, не видна ни в чистоте, ни в списке примесей
Откуда берутся примеси, почти целиком определяет способ производства
Ключ к третьему слепому пятну лежит в способе производства, потому что состав примесей определяется тем, как сырьё получено. Способы получения NMN делятся на три основные группы.
| Показатель | Полный химический синтез | Дрожжевая ферментация | Ферментативный катализ |
|---|---|---|---|
| Как получают | Собирают химическими реакциями | Синтезируют дрожжами | Превращают ферментативной реакцией |
| Контроль стереоформы | Возможна примесь α-формы | Только β-форма | Только β-форма |
| Ожидаемые примеси | Остатки реагентов и растворителей, α-форма | Компоненты, связанные с культивированием | Компоненты субстрата и фермента |
| Что стоит проверить | Остаточные растворители, содержание в пересчёте на β-форму | Стадию удаления компонентов культуры | Остатки непрореагировавшего субстрата |
Таблица не указывает на превосходство какого-либо способа. У каждого способа свой набор ожидаемых примесей, поэтому и проверять нужно разное.
Здесь появляется различие, которого нет ни в значении чистоты, ни в списке примесей, — «α-форма» из строки «контроль стереоформы».
Правая и левая рука — у молекул тоже есть право и лево
Самый короткий путь к пониманию α-формы — собственные руки. В зеркале правая и левая руки выглядят одинаково. Но совместить их не получается. Левая рука не входит в перчатку для правой.
С молекулами происходит то же самое. Виды атомов, их число и порядок связей полностью совпадают, а различается только пространственное строение — такие пары молекул существуют, и называют их стереоизомерами. Те, что относятся друг к другу как предмет и его зеркальное отражение, — энантиомеры; те, что различаются лишь частью стереоцентров, — диастереомеры.
И ферменты организма строго различают эту разницу. Как и с перчаткой: если форма не подходит, вещество не работает.
На что указывает β в названии «β-NMN»
Буква β, которая стоит в названиях продуктов и в спецификациях как «β-NMN», — это как раз обозначение пространственной формы. У NMN есть β-форма и α-форма, и они относятся друг к другу как аномеры (различие только в одном положении сахара): строение рибозы различается лишь в одной точке.
В организме образуется и превращается дальше в NAD (кофермент, участвующий в энергетическом обмене клетки) именно β-форма. α-форма в природе не встречается: она образуется вместе с β-формой в ходе химического синтеза и не включается в путь превращения в NAD. В рецензируемых публикациях её так и описывают — как «не обладающий физиологической активностью α-NMN».
При полном химическом синтезе разделить эти формы сложно, и α-форма попадает в продукт. Способы на основе ферментативных реакций и ферментации стереоспецифичны, поэтому дают только β-форму.
Главное
У α-формы та же молекулярная формула, что и у β-формы. Поэтому в списке примесей, составленном по молекулярным формулам, она не появляется отдельной позицией. Даже при «99% в пересчёте на NMN» доля β-формы остаётся отдельной информацией. Признаков, по которым её можно распознать, два: способ производства и содержание «в пересчёте на β-NMN».
Три пункта, которые стоит проверить в документации
Три слепых пятна выше прямо превращаются в три вопроса к поставщику. При сравнении сырья задавайте их в этом порядке.
-
Каким методом получено значение чистоты?
Если это число только по методу ЖХ-УФ, компоненты без поглощения в УФ-области в нём не отражены. Чистоту без указания метода бессмысленно ставить рядом с числом другого поставщика.
-
Что измеряется помимо чистоты?
Содержание влаги, остаточные растворители, тяжёлые металлы, эндотоксин (пирогенное вещество бактериального происхождения) — фактический объём информации определяется числом и содержанием таких показателей, ведь само значение чистоты не говорит, что представляют собой оставшиеся несколько процентов.
-
Какой способ производства и указано ли содержание «в пересчёте на β-NMN»?
Именно отсюда видно, может ли присутствовать α-форма. Способы на основе ферментативных реакций и ферментации стереоспецифичны и дают только β-форму.
Для нашего β-NMN на странице продукта опубликованы, помимо испытания на чистоту, результаты по содержанию влаги, четырём показателям тяжёлых металлов и эндотоксину. Вопросы о способе производства и условиях измерений можно направить через форму связи.
Об этих данных
Рис. 1 и рис. 2 подготовлены нами по аналитическим данным четырёх проб, полученных компанией. Это результаты по конкретным четырём пробам, а не тенденция для всего представленного на рынке сырья NMN. Названия проб и страны производства не указываются.
Цель публикации — не оценка отдельных проб, а две зависимости: значение чистоты меняется в зависимости от метода измерения, а при близкой чистоте число видов примесей может различаться. Используйте это как перечень вопросов при сравнении сырья.
Часто задаваемые вопросы
Достаточно ли надписи «чистота не менее 99%»?
Одного этого числа для оценки недостаточно. Оно меняется в зависимости от метода измерения, а чистота показывает лишь то, какой процент приходится не на NMN, — из чего состоит остаток, это отдельная информация. Проверяйте метод измерения вместе с показателями помимо чистоты: содержанием влаги, тяжёлыми металлами, эндотоксином.
Какое значение верное — по методу ЖХ-УФ или по методу ЯМР?
Верного из них нет: методы видят разное. ЖХ-УФ обнаруживает только компоненты, поглощающие в УФ-области, а ЯМР широко улавливает компоненты, содержащие водород. Если расхождение между двумя числами велико, проба может содержать компоненты без поглощения в УФ-области.
Как узнать, присутствует ли α-форма?
У α-формы та же молекулярная формула, что и у β-формы, поэтому в списке примесей, составленном по молекулярным формулам, она не появляется отдельной позицией. На практике следует уточнить способ производства: ферментативные и ферментационные способы стереоспецифичны и дают только β-форму. Также проверьте, указано ли содержание в спецификации «в пересчёте на β-NMN», а не «в пересчёте на NMN».
Настоящая статья описывает методы анализа и способы производства сырья. Наш β-NMN поставляется как реагент для научных исследований и не предназначен для демонстрации какого-либо эффекта от приёма.
Спецификация и результаты испытаний β-NMN Реально ли получать NMN из продуктов питания