Суть статьи за 30 секунд
- «Испытания безопасности пройдены» означает разное — смотря о каком уровне речь. Уровня три: сырьё (донор), процесс (производственная среда) и готовый препарат. Чтобы такая надпись появилась, достаточно одного лишь испытания препарата на стерильность.
- Три теста закрывают пробелы друг друга. Испытание на стерильность видит то, что живёт и растёт; тест на микоплазму — бактерии, которые проходят сквозь эту сеть; тест на эндотоксины — то, что осталось от погибших бактерий.
- Проверить стоит три вещи: каждую ли партию испытывают, доходит ли дело до донора и выдают ли протокол. Запросите сертификат анализа (COA) с номером партии — и увидите, что именно стоит за надписью.
Общая картина — испытания делятся на три уровня
Испытания безопасности кондиционированной среды и секретома (совокупности компонентов, которые клетки выделяют в ходе культивирования) делятся на три уровня: сырьё, процесс и готовый препарат. На разных уровнях предотвращаются и разные риски.
Если провести аналогию с овощами, это анализ почвы на поле (сырьё), санитарный контроль на производстве (процесс) и проверка перед отгрузкой (готовый препарат). Словом «проверено» можно назвать и одну только проверку перед отгрузкой, поэтому по самой формулировке уровни не различить.
Главное
На практике это различие важнее всего. Можно провести только испытание готового препарата на стерильность — и написать, что «испытания безопасности пройдены». Ложью это не будет, но о риске инфекций, связанном с донором, такая формулировка не говорит ничего. Именно поэтому и нужно уточнять, какой уровень и в каком объёме проверяли.
1. Сырьё — донора можно остановить только на входе
Вывод простой: риски, связанные с донором клеток, невозможно обнаружить, исследуя готовый препарат. Вирусы не выявляются обычным испытанием на стерильность, и нет гарантии, что производственный процесс их удалит.
Поэтому на этом уровне всё сводится к обследованию до приёмки клеток: не пропустить риск на входе. Мы проводим следующие обследования в соответствии с правилами производства для сырья биологического происхождения (生物由来原材料基準).
| Объект | Показатели |
|---|---|
| Вирусы | Вирус иммунодефицита человека (типы 1 и 2) / вирус гепатита B / вирус гепатита C / Т-лимфотропный вирус человека (типы 1 и 2) |
| Бактерии | Сифилис |
| Прионы | Трансмиссивные губчатые энцефалопатии человека |
В отношении трансмиссивных губчатых энцефалопатий применяется в том числе отбор по результатам опроса. Отказ от бычьей сыворотки в составе также имеет значение для исключения прионных рисков животного происхождения.
2. Процесс — не испытание, а снижение вероятности контаминации
Суть этого уровня в том, что речь идёт об оборудовании и регламентах, а не об испытаниях. Контаминацию здесь не выявляют постфактум — снижают саму вероятность того, что она произойдёт.
Производство ведётся в боксах биологической безопасности класса 100, установленных внутри чистой зоны класса 10 000, и организовано в соответствии с требованиями к среде, рекомендованными для производства продуктов регенеративной медицины. Класс 100 означает не более 100 частиц размером 0.5 μm и больше в одном кубическом футе воздуха.
Важно помнить: класс чистоты — это характеристика оборудования, а не результат испытания и не сертификация. Этот уровень снижает вероятность, а состояние самого продукта проверяется на следующем уровне — на уровне готового препарата.
3. Готовый препарат — три теста выявляют разное
Это главное, о чём мы хотим сказать в этой статье. Три теста не дублируют друг друга «на всякий случай»: каждый выявляет своё, и потому нужны все три.
Испытание на стерильность — то, что живёт и растёт
Пробу помещают в питательную среду и смотрят, начнут ли размножаться микроорганизмы. Проще всего представить это как посев семян: смотрят, взойдут ли всходы. Так выявляют бактериальную и грибковую контаминацию.
Что не выявляется: всё, что не всходит, то есть микроорганизмы, не растущие в данных условиях культивирования. Типичный пример — микоплазмы (очень мелкие бактерии, лишённые клеточной стенки). Кроме того, уже погибшие бактерии не размножаются и потому не обнаруживаются.
Тест на микоплазму — ловит то, что проходит сквозь сеть
Микоплазмы — бактерии без клеточной стенки, очень мелкие; в условиях обычного испытания на стерильность они не выявляются. Как рыба мельче ячейки проходит сквозь сеть, так и микоплазму нельзя исключить по одному лишь соответствию требованиям стерильности, поэтому нужен отдельный тест.
В клеточной культуре проблема ещё и в том, что контаминацию легко не заметить и продолжать культивирование. Именно поэтому подтверждение отдельно от испытания на стерильность обязательно.
Тест на эндотоксины — то, что осталось от погибших бактерий
Эндотоксин (пирогенное вещество бактериального происхождения) — компонент клеточной стенки грамотрицательных бактерий (бактерий с наружной мембраной). Как зола остаётся после погасшего костра, эндотоксин сохраняется и после гибели бактерий. То есть эндотоксины могут присутствовать и в образце, прошедшем испытание на стерильность.
В нашем секретоме стволовых клеток — менее 0.1 EU/mL.
Главное
Три теста закрывают пробелы друг друга. Испытание на стерильность видит живые бактерии, тест на микоплазму — бактерии, невидимые для испытания на стерильность, тест на эндотоксины — вещество, оставшееся от погибших бактерий. По любому из них в отдельности нельзя сказать ничего о том, что выявляют два других.
Как читать «менее» в цифрах по эндотоксинам
Сразу к выводу: при сравнении формулировок вида «менее 0.1 EU/mL» важнее самой цифры то, откуда она взялась. Проверить стоит два момента.
Первый — предел обнаружения это или норма спецификации. «Менее» иногда означает лишь то, что данная методика ничего не обнаружила. Чем крупнее цена деления у весов, тем шире диапазон, который они назовут «слишком лёгким»; точно так же при низкой чувствительности методики «менее» можно написать и рядом с более крупным числом.
Второй — к какой единице отнесено значение. EU/mL — это величина на объём жидкости. Одна и та же щепотка соли даёт разную концентрацию в стакане и в ведре; так же и для лиофилизированных препаратов, которые перед применением растворяют, смысл меняется в зависимости от того, при растворении в каком объёме получено значение.
Три вопроса поставщику — проверяем по сертификату анализа (COA)
Всё сказанное выше сводится к трём вопросам. На все продукты мы выпускаем сертификат анализа (COA) по каждой партии и вкладываем его в упаковку. В нём приведены результаты по стерильности, эндотоксинам, микоплазме и концентрации белка.
При сравнении поставщиков рекомендуем задавать их в таком порядке.
-
Испытывается каждая партия или только представительная?
Если измерения не выполняются по партиям, о продукте, который у вас в руках, сказать нечего.
-
Входит ли обследование донора?
Испытания готового препарата не дают никаких гарантий по рискам на уровне сырья.
-
Выдадут ли на практике протокол с номером партии?
Запросите не перечень наименований показателей, а сам документ. По тому, смогут ли его предоставить, видно, как всё устроено на деле.
Помимо этого, в перечень входят паспорт безопасности продукта (MSDS) и накожная проба.
О том, что и как уточнять у поставщика, а не только о самих показателях, написано в материале шесть пунктов для проверки поставщика; терминология и общая картина технологии — в материале что такое секретом.
Часто задаваемые вопросы
Если препарат прошёл испытание на стерильность, можно ли считать, что бактерий в нём нет?
Испытание на стерильность выявляет микроорганизмы, которые дают рост в питательной среде. Микроорганизмы, не растущие в этих условиях, не обнаруживаются. Типичный пример — микоплазмы: обычным испытанием на стерильность их не найти, поэтому мы дополнительно проводим тест на микоплазму. Кроме того, уже погибшие грамотрицательные бактерии (бактерии с наружной мембраной) при испытании на стерильность не выявляются, но эндотоксин — компонент их клеточной стенки — сохраняется. Три теста выявляют разное, поэтому нужны все.
Что уточнять, если указано только «проводятся испытания безопасности»?
Уточните, какой уровень был исследован. Испытания безопасности делятся на три уровня: обследование донора как источника сырья, контроль производственного процесса и испытания готового препарата. Объём гарантий совершенно разный, если речь идёт только об испытании препарата на стерильность и если в него входит обследование донора на инфекции. Заодно уточните, проводятся ли испытания для каждой партии или только для представительной.
Выдаётся ли сертификат анализа (COA) каждый раз?
На все продукты мы выпускаем COA по каждой партии и вкладываем его в упаковку. В нём приведены результаты по стерильности, эндотоксинам, микоплазме и концентрации белка.
Эта статья посвящена управлению качеством и перечню испытаний. Наш секретом стволовых клеток поставляется как реагент для научных исследований и не предназначен для демонстрации эффективности при каких-либо заболеваниях.
Подробнее о системе безопасности Запросить сертификат анализа