Что такое секретом?
Шесть условий для термина без официального определения

1. Сначала вывод — три термина вложены друг в друга

«Кондиционированная среда стволовых клеток». «Секретом». «Экзосома». Эти три понятия нельзя сравнивать как равнозначные: они вложены друг в друга, как матрёшки. Начните с того, чтобы зафиксировать это расположение по одной схеме.

Внешний слой — кондиционированная среда стволовых клеток — это всё, что содержится в жидкости после культивирования стволовых клеток. Помимо компонентов, выделенных клетками, в ней могут присутствовать компоненты питательной среды, компоненты животного происхождения, например бычья сыворотка, факторы, добавленные для культивирования, а также клеточный дебрис и аммиак, образовавшиеся в ходе культивирования.

Внутри неё находится секретом — то, что состоит только из компонентов, выделенных клетками. Значит, «кондиционированная среда или секретом» — это не сравнение двух разных вещей, а вопрос о том, где провести границу: какую часть внешней рамки включать в продукт.

В самой глубине находятся экзосомы — разновидность мембранных везикул (внеклеточных везикул), входящих в состав секретома (подробнее — в статье что такое экзосома). Это не отдельная категория, стоящая рядом с секретомом. Препарат экзосом получают, выделяя из секретома только мембранные везикулы; на этом этапе теряются растворимые факторы — цитокины (белки, передающие сигналы между клетками) и факторы роста (подробнее — в статье что теряется, если выделить только экзосомы).

2. У термина «секретом» нет официального определения

Это отправная точка. У слова «секретом» нет ни официального определения, ни отраслевого стандарта. Это не категория Закона о фармацевтике и медицинских изделиях и не критерий, установленный научным обществом.

Поэтому объяснения разных поставщиков расходятся. Одни используют это слово почти как синоним кондиционированной среды, другие — для обозначения степени концентрирования, и ни то, ни другое нельзя назвать ошибкой. Это как спорить о длине без общей линейки: сколько ни сопоставляй сами слова, разговор не сойдётся.

Следовательно, покупателю остаётся завести собственное мерило. Ниже приведено определение, которое мы применяем к своей продукции. Это не общеотраслевой стандарт, но он подсказывает, что именно стоит проверять.

3. Шесть условий, при которых мы называем продукт секретомом

Сразу вывод: секретомом мы называем только то, что отвечает всем шести условиям сразу. Номера служат для идентификации и не выражают ни порядка, ни приоритета.

1. 1

   Состоит только из компонентов, выделенных клетками или тканями

2. 2

   В среде для сбора не остаётся цитокинов и факторов роста

3. 3

   Содержит белки, пептиды, нуклеиновые кислоты и мембранные везикулы, включая экзосомы

4. 4

   Не содержит аммиака, тяжёлых металлов и других вредных веществ, а также погибших клеток и прочих примесей

5. 5

   Производится без бычьей сыворотки

6. 6

   Состав подтверждён измерениями (количественное определение белка, измерение основных цитокинов, анализ экзосом)

Почему именно эти шесть — три группы разного характера

Шесть условий делятся на три группы, разные по характеру: что не должно попасть внутрь, что должно остаться и можно ли это проверить.

Условия 1, 2 и 5 определяют, что не должно попасть в продукт. Это граница, ограничивающая происхождение компонентов только тем, что выделили клетки. Обработкой после сбора её не обеспечить: она задаётся конструкцией питательной среды и процесса культивирования.

Условие 3 определяет, что должно остаться. Если стремиться только к снижению примесей, вместе с ними теряются и целевые компоненты. Требуется сочетание: сохранить разнообразные секретируемые компоненты, включая мембранные везикулы, и одновременно удалить ненужное.

Условия 4 и 6 определяют, можно ли это проверить. Насколько бы тщательно ни были продуманы пункты с первого по третий, без измерений покупатель не сможет их подтвердить. Поэтому в условия входит и возможность выдать результаты письменно, в виде протокола испытаний.

4. Как это производится — не «удалить потом», а «не вносить с самого начала»

Сразу вывод: выполнимость шести условий определяется не технологией очистки после сбора, а конструкцией питательной среды и процесса культивирования, при которой ненужные компоненты вообще не вносятся. Чем долго фильтровать мутную воду, надёжнее с самого начала взять чистую — вот сама логика.

Способы производства делятся на три группы: кондиционированная среда без какой-либо обработки; кондиционированная среда, из которой ненужные компоненты удаляют после сбора; и конструкция, при которой их не вносят изначально. У промежуточного варианта — удаления постфактум — есть предел: полностью удалить компоненты сложно.

Конструкция питательной среды

Мы с нуля разработали питательную среду без сырья животного происхождения, бессывороточную и безбелковую (конструкция, при которой белок в среду не добавляют). Питательная жидкость для сбора не содержит белков, происходящих из среды. Условия 2 и 5 выполняются именно за счёт такой конструкции среды.

Производственная среда

Производство ведётся в боксе биологической безопасности класса 100, установленном в чистой зоне класса 10,000. Работа организована в соответствии с требованиями к среде, рекомендованными для производства продуктов регенеративной медицины.

Сотрудники

Все сотрудники, занятые в производстве, имеют докторскую степень в области медицины или фармации. Разработку и производство ведут специалисты с опытом исследовательской работы более 10 лет в национальных университетах и других научных организациях.

5. Как это проверить — стандарты качества, подтверждаемые протоколом испытаний

Сколько ни объясняй определение и способ производства, объяснение само по себе не даёт возможности проверить. В итоге решает условие 6 — подтверждённый состав, то есть возможность показать результаты измерений на бумаге. Ниже перечислены испытания, которые мы проводим.

Испытания проводятся в соответствии с правилами производства из сырья биологического происхождения. Результаты можно проверить в сертификате анализа (COA) на каждую партию.

6. Форма выпуска и хранение — выбор зависит от наличия морозильной камеры

Есть две формы выпуска — лиофилизированная и жидкая замороженная, и они требуют разного оборудования для хранения. Лиофилизированную форму можно хранить при комнатной температуре в защищённом от света месте (до 40 °C), поэтому её могут применять и учреждения без морозильной камеры. Жидкая замороженная форма требует хранения в замороженном виде (при −20 °C и ниже).

Что пока остаётся неизвестным — измеримое и известное не одно и то же

До сих пор речь шла об определении, способе производства и измеримых показателях. Измеримое и известное — не одно и то же. При сравнении продуктов просим учитывать также следующие три пункта.

• Перечень компонентов не объясняет действие. Количественные значения цитокинов показывают, что и в каком количестве содержится, но не то, как это работает.
• Разброс между партиями не сводится к нулю. Поскольку сырьё имеет биологическое происхождение, полностью идентичный состав воспроизвести невозможно. Именно поэтому мы проводим измерения для каждой партии и прикладываем протокол.
• Само слово «секретом» ещё не устоялось. Шесть условий из этой статьи — не отраслевой консенсус, а наше определение. Через несколько лет стандартом может стать другая систематизация.

Выбирая поставщика, надёжнее смотреть не на категоричные формулировки, а на то, способен ли он отделять измеренные факты от предположений.

Часто задаваемые вопросы

Секретом и кондиционированная среда стволовых клеток — это просто разные названия одного и того же?

Нет. Кондиционированная среда стволовых клеток — это всё, что содержится в жидкости после культивирования. Помимо компонентов, выделенных клетками, в ней могут присутствовать компоненты питательной среды, компоненты животного происхождения, факторы, добавленные для культивирования, и клеточный дебрис. Секретом состоит только из компонентов, выделенных клетками. При этом официального определения у этого термина нет, поэтому его используют и в более широком значении.

Что выбрать — препарат экзосом или секретом?

Эти два продукта нельзя сравнивать как равнозначные варианты. Экзосомы — один из компонентов секретома, а препарат экзосом получают, выделяя из секретома только мембранные везикулы. На этапе выделения теряются растворимые факторы (компоненты, которые работают растворёнными в жидкости): цитокины, факторы роста. Выбор зависит от того, что вы хотите сохранить.

Существует ли отраслевой стандарт для понятия «секретом»?

Нет. Ни официального определения, ни отраслевого стандарта не существует, поэтому объяснения разных поставщиков расходятся. Шесть условий, приведённые в этой статье, — это определение, которое мы применяем к собственной продукции. Используйте их как мерило при сравнении.

Посмотреть спецификацию секретома → Запросить протокол испытаний и данные о составе →